Uso da citometria de fluxo no diagnóstico das imunodeficiências primárias

O sistema imunitário adaptativo, como o próprio nome diz, vai sendo formado na medida em que o organismo entra em contato com substâncias que não lhe são próprias (antígenos), desenvolvendo uma resposta específica para cada antígeno. O mais interessante é que a imunidade adaptativa também produz células de memória, de maneira que em um próximo encontro com o mesmo antígeno, a resposta seja mais rápida e eficaz. É como se o sistema imunitário aprendesse sobre como enfrentar aquele antígeno e memorizasse esse aprendizado. Basicamente, a imunidade adquirida depende dos linfócitos T e B, bem como das células dendríticas.

Defeitos em qualquer um desses compartimentos do sistema imunitário levam a algum quadro clínico do espectro das imunodeficiências primárias (IDP), grupo que engloba mais de 406 doenças causadas por cerca de 430 defeitos genéticos descritos até o momento. A depender do grupamento celular envolvido, a IDP em questão pode ser subclassificada como imunodeficiência humoral, combinada, inata, dentre outros.

A imunodeficiência humoral se caracteriza pela diminuição no número das células B, menor produção de anticorpos ou ambos os fenômenos. Como os anticorpos possuem importante papel na proteção das vias aéreas e das superfícies mucosas em geral, esses pacientes apresentam otite média, sinusite e pneumonia recorrentes.

As imunodeficiências celulares ou combinadas, embora primariamente afetando a célula T, podem também ser acompanhadas por alterações secundárias na célula B, já que o funcionamento desta última requer função intacta da célula T simultaneamente. A principal característica dos pacientes com esses defeitos é sua maior suscetibilidade a infecções graves, ocasionadas por vários agentes, como vírus, fungos e bactérias intracelulares.

Quando pensar em IDP?

Elaborado pela Fundação Jeffrey Modellnos, em 1996, os sinais de alerta auxiliam o reconhecimento de provável IDP. Diante de ao menos um sinal, indica-se a investigação da doença.

São considerados sinais de alerta:

• Dois ou mais episódios de pneumonia no último ano
• Oito ou mais novos episódios de otite no último ano
• Estomatite de repetição ou monilíase por mais de dois meses
• Abscesso de repetição ou ectima
• Um episódio de infecção sistêmica grave (meningite, artrite, osteomielite, septicemia)
• Infecções intestinais de repetição / diarreia crônica
• Asma grave, doença do colágeno ou doença autoimune
• Efeito adverso ao BCG e/ou infecção por micobactéria
• Fenótipo clínico sugestivo de síndrome associada à imunodeficiência
• História familiar de imunodeficiência

Além do diagnóstico clínico, os exames laboratoriais são muito importantes para a investigação e definição diagnóstica precisa. Entre os vários exames relevantes nesse contexto, a imunofenotipagem das células por citometria de fluxo apresenta posição de destaque.

O que é citometria de fluxo?

A citometria de fluxo utiliza anticorpos monoclonais contra marcadores específicos de cada subtipo celular para identificar e quantificar as diferentes células do sistema imunitário. Esses anticorpos estão conjugados a substâncias fluorescentes que emitem luz de cor característica, quando estimulados por um feixe de laser.

Um citômetro de fluxo tem 5 principais componentes: uma célula de fluxo; uma fonte de luz (normalmente lasers de excitação de gases, como Argônio e Hélio-Neon e lasers de estado sólido) de diversos comprimentos de onda (cores); um sistema óptico/eletrônico composto de filtros e detectores que captam as luzes emitidas pelos lasers e pelas substâncias fluorescentes e as convertem em sinais eletrônicos analógico e em digital, e amplificando esses sinais (linear ou logarítmico) e um computador para análise de sinais. A célula de fluxo assegura um fluxo organizado das células, de maneira que cada célula é exposta individualmente aos lasers e emitirá luz correspondente ao seu subtipo, sendo imediatamente computada pelo sistema, como se estivessem em uma “fila indiana”. Em poucos segundos, o aparelho consegue contar e discriminar os tipos celulares presentes na amostra.

 Como diagnosticar laboratorialmente as IDP

Na investigação da imunidade humoral, o diagnóstico laboratorial envolve a mensuração dos níveis de imunoglobulinas circulantes totais (IgG, IgM, IgA) e a determinação da resposta vacinal pneumocócica. Uma vez determinada a existência de imunodeficiência humoral, é importante realizar a imunofenotipagem de células B por citometria de fluxo. Ao quantificar todas as subpopulações de células B e avaliar o perfil maturativo da linhagem de células B, a imunofenotipagem permite definir, em última análise, os subtipos de imunodeficiências humorais. Esta informação é importante para melhor entendimento do prognóstico e abordagem terapêutica para cada caso específico.

Nas imunodeficiências celulares ou combinadas, a imunofenotipagem de células T permite identificar e quantificar as células imaturas, recém-emigrantes do timo, de memória central, periférica e efetora, tanto do compartimento CD4+ (auxiliares) quanto do CD8+ (citotóxicas), além de determinar a frequência das reguladoras (Treg) por meio da expressão da proteína FOXP3, aliada a expressão de altos níveis do receptor de membrana CD25. Ademais, a imunofenotipagem de células T e a cultura de linfócitos sob estímulo com mitógenos são importantes parâmetros para o diagnóstico das imunodeficiências combinadas graves (do inglês, SCID). Adicionalmente, a avaliação das subpopulações de linfócitos T pode sugerir o diagnóstico de diferentes doenças relacionadas, tais como as formas mais brandas das imunodeficiências combinadas graves (leaky-SCID) e a síndrome IPEX (imunodesregulação, poliendocrinopatia e enteropatia ligada ao X).

Confira o painel abaixo: